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        細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL)染色試劑盒中文版

        更新時間:2023-10-24  |  點擊率:390

        MX80070.1 v.A

         

          細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL染色試劑盒產品說明書

        (中文版)

         

        主要用途

         

          細胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法(SCHMORL染色試劑是一種旨在使用鐵還原法技術,分析細胞樣品中晚期脂褐素沉積現象,從而在光學顯微鏡下觀察到色表達的細胞作為細胞復制性衰老replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老細胞的而經典的技術方法。該技術經過精心改良SCHMORL方法、成功實驗證明的。主要適用于動物細胞的晚期脂褐素檢測。廣泛應用于細胞生物學研究。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,顯色清晰。  

         

        技術背景

         

        細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期,表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征,其中脂褐素顆粒聚集增多成為細胞衰老的特征性生物學標記。脂褐素(lipofusin),又稱為“磨損(wear and tear)"色素,是一種細胞內與年齡相關的棕黃色熒光胞漿顆粒色素,主要在有絲分裂后細胞的繼發性溶酶體內。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細胞里,例如心臟、肝臟和神經等,尤其在衰老誘導的細胞退變中聚集增多,特別是的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質,成為細胞衰老中后期的獨立指征。脂褐素分為早期和晚期,晚期脂褐素作為較強還原性物質,在鐵離子的存在下,使鐵(ferricyanide)轉化為亞鐵(ferrocyanide),產生不可溶性普魯士藍(Prussian blue)產物,顯示藍色。

          

        產品內容

         

          清理液(Reagent A              毫升

          固著液(Reagent B          毫升

          染色液(Reagent C          毫升

          酸性液(Reagent D          毫升

        產品說明書               1份

         

        保存方式

         

        保存在4冰箱里;   染色液(Reagent C避免光照;有效保證3

         

        用戶自備

         

        小型染色缸:用于細胞染色操作

        光學顯微鏡:用于觀察染色后的細胞

         

         

         

         

        實驗步驟

         

        操作一:細胞載玻片染色

         

        1. 取出待測的細胞載玻片或細胞涂片 

        2. 小心加上xx微升  清理液(Reagent A在載玻片上,鋪滿整個樣品表面

        3. 小心移去載玻片上的  清理液(Reagent A

        4. 小心加上xx微升  固著液(Reagent B在載玻片上,鋪滿整個樣品表面

        5. 在室溫下孵育5分鐘

        6. 小心移去載玻片上的  固著液(Reagent B

        7. 小心加上xx微升  清理液(Reagent A),清洗樣品表面

        8. 在室溫下孵育2分鐘

        9. 小心移去載玻片上的  清理液(Reagent A

        10. 小心加上xx微升  染色液(Reagent C在載玻片上,鋪滿整個樣品表面

        11. 在室溫下孵育10分鐘

        12. 小心移去載玻片上的  染色液(Reagent C

        13. 小心將載玻片置入xx毫升  清理液(Reagent A的小型染色缸里 

        14. 室溫下孵育2分鐘

        15. 取出載玻片,小心移去載玻片上的  清理液(Reagent A

        16. 小心加上xx微升  酸性液(Reagent D在載玻片上,鋪滿整個樣品表面

        17. 在室溫下孵育5分鐘

        18. 小心移去載玻片上的  酸性液(Reagent D

        19. 小心加上xx微升  清理液(Reagent A),清洗樣品表面

        20. 小心移去載玻片上的  清理液(Reagent A

        21. (選擇步驟)復染(建議使用  核固紅復染試劑盒——   40011

        22. 放上蓋玻片或封片(水相或中性樹脂)

        23. 即刻在一般光學顯微鏡下觀察(注意:參見注意事項3):脂褐素陽性細胞呈現色,細胞核呈現紅色(如果復染)

         

        操作二:24孔細胞培養板染色

         

        1. 小心抽去24孔細胞培養板里的培養液

        2. 每孔加入xx微升  清理液(Reagent A,清洗生長中的細胞表面

        3. 小心抽去每孔里的  清理液(Reagent A

        4. 每孔加入xx微升  固著液(Reagent B,覆蓋整個生長表面

        5. 在室溫下孵育5分鐘

        6. 小心抽去每孔里的  固著液(Reagent B

        7. 每孔加入xx微升  清理液(Reagent A,清洗細胞表面

        8. 在室溫下孵育2分鐘

        9. 小心抽去  清理液(Reagent A

        10. 每孔加入xx  染色液(Reagent C,覆蓋整個生長表面

        11. 在室溫下孵育10分鐘

        12. 小心抽去  染色液(Reagent C

        13. 每孔加入xx微升  清理液(Reagent A,清洗細胞表面

        14. 在室溫下孵育2分鐘

        15. 小心抽去  清理液(Reagent A

        16. 重復實驗步驟1315二次

        17. 小心加上xx微升  酸性液(Reagent D,覆蓋整個生長表面

        18. 室溫下孵育5分鐘

        19. 小心抽去  酸性液(Reagent D

        20. 小心加入xx微升  清理液(Reagent A

        21. 小心抽去  清理液(Reagent A

        22. (選擇步驟)復染(建議使用  核固紅復染試劑盒 40011

        23. 小心加入xx微升  清理液(Reagent A

        24. 即刻在一般光學顯微鏡下觀察(注意:參見注意事項3):脂褐素陽性細胞呈現藍色,細胞核呈現紅色(如果復染)

         

        注意事項

         

        1. 本產品為50次(細胞載玻片)和25次(124孔板)操作

        2. 本產品還可以染色其它還原性物質,包括黑色素(melanin)、肝膽汁(liver bile)、腸嗜鉻細胞(enterochromaffin)等

        3. 本產品不同于其它脂褐素組化染色,其基于生化反應產生的顯色反應,與樣品的關聯性很強。樣品的狀態,例如新鮮與否、置于空氣時長等,會嚴重影響染色效果

        4. 操作時,須戴手套

        5. 使用時,避免污染母液

        6.   染色液(Reagent C避免光照

        7. 試劑溶液在樣品表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿樣品表面

        8. 染色完成后,即刻進行光學顯微鏡觀察

        9. 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產品

         

        質量標準

         

        1. 本產品經鑒定性能穩定

        2. 本產品經鑒定著色清晰 

         


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